山西动物细胞模型细胞分离培养「英瀚斯」

三、实验指标区域指标开臂1停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）开臂2停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）开臂3停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）其他臂停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）四、实验方法及应用

1) 动物适应实验环境1周后，称重，禁食24小时。此后每天训练结束后限制性地给予正常食料（据体重不同，大鼠16-20g，小鼠2-3g），以使体重保持在正常进食大鼠的80%~85%。

2) 第二天，迷宫各臂及***区分撒着食物颗粒（每只4~5粒，直径约3~4mm）。然后，同时将4只动物置于迷宫***（通往各臂的门打开）。让其自由摄食、探究10min。

3) 第三天，重复第二天的训练。这一过程让动物在没有很强的应激条件下熟悉迷宫环境。

4) 第四天起，动物单个进行训练：在每个臂靠近外端食盒处各放一颗食粒，让动物自由摄食。食粒吃完或10min后将动物取出。

5) 第五天，将食物放在食盒内，重复前一天的训练，一天2次。

6) 第六天以后，随机选4个臂，每个臂放一颗食粒；各臂门关闭，将动物放在迷宫***；30s后，臂门打开，让动物在迷宫中自由活动并摄取食粒，直到动物吃完所有4个臂的食粒。如经10min食粒仍未吃完，则实验终止。每天训练两次，其间间隔1h以上。

难点与关键点

将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注针插入右心室。

1.3改良多平台睡眠剥夺法

在MMPM 中将 10 只大鼠(具体数目可根据实际需要确定)同时放在装有 14 或 15 个台的水槽中(长 127 cm ，宽 44 cm ，高 45 cm )进行实验，这样既避免了 SP及M P中单只大鼠与群体隔离的缺点，又保留了 M P 中活动范围增大的特点，因在实验时大鼠多是 3 只或 4 只一笼进行饲养，如 1 组实验需 10 只大鼠，则需要3笼或 4笼大鼠，考虑到来自不同笼的大鼠放在一起实验也可能造成群体的不稳定，有学者将实验方法进一步改良，将实验所需的 10 只大鼠放在同一只笼中饲养 2 周，实验时再将这些大鼠放在一起同时进行睡眠剥夺实验，这样以克服实验时大鼠群体不稳定的缺点，从而将实验时的不确定因素减至低! 实验研究发现在MMPM中'经采取措施保持大鼠群体稳定性及避免大鼠与群体分离后' 大鼠上腺重量%体重减轻量%中促上腺皮质(A CTH )和上腺皮质酮 (CO RT) 的含量均较M P中为低，提示M M PM 较 M P 具有更低的应激性，是较为理想的REM 剥夺方法。

3轻柔刺激法

此方法在短期的睡眠剥夺实验中应用较多，当实验人员通过观察大鼠行为或通过脑电波监护观察到大鼠进入睡眠时，通过轻轻拍打大鼠笼子或应用声音、光线的刺激促使大鼠保持清醒，必要时还可用纸卷、铅笔或用手直接触摸大鼠使大鼠无法进入睡眠。注意不能将大鼠移出笼外!此方法简单易行，在脑电监护情况下可进行 TSD 或 SSD 实验，在无脑电监护时需要实验人员在旁不间断观察大鼠行为，故较适合行短时间的睡眠剥夺实验。

4睡眠剥夺法

定时给大鼠***， 此类方法简单易行，操作方便，不需要特殊仪器。缺点是大鼠存在个体差异， 睡眠剥夺的效果及程度及不易掌握。多用在研究某些特殊药理作用的实验中。