湖州流式细胞常用指南「英瀚斯」

yao物对细胞的IC50检测  

     IC50 (half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半***浓度。6．加入辣根过氧化物酶结合的亲合素（***i-HRP）（2μg/ml），37℃孵育30min，弃掉液体，PBS-T洗涤3次，每次3min。它能指示某一yao物或者物质(yi制剂)在***某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质，比如酶，细胞受体或是微生物)的半量。在凋亡方面，可以理解为一定浓度的某种药wu诱导肿liu细胞凋亡50%，该浓度称为50%***浓度，即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度，IC50值可以用来衡量yao物诱导凋亡的能力，即诱导能力越强，该数值越低，当然也可以反向说明某种细胞对yao物的耐受程度。

关于细胞培养的常见问题:

Q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理？

A: 贴壁细胞在移除原培养液后，用 PBS 冲洗 2-3 遍；悬浮细胞离心移除原培养液后，加入 PBS 重悬，离心移除 PBS; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍，用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。

Q：细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗？

A：长期保存的细胞应当放在液氮（-196℃）中保存，短时间（一般 1 周-2 周）可以存放在 -80℃。

Q：培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？

A：都可以。只是在使用密封盖培养瓶时，瓶盖旋至约 2/3，不要完全拧紧，预留约 1/3 以便细胞可以透气；有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。

Q:何谓 FBS,FCS,CS,HS?

A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之间没有区别，都是指胎牛；FCS 不是正规命名，尽量不使用。Calf Serum（CS）则是指小牛。Horse Serum(HS)则是指马。

Q:中的沉淀物对细胞培养有什么影响？

A:（1）细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它生产商也证明了这一点。

（2）过滤，如果中出现大量的沉淀物，将很难过滤。贴壁细胞:先倒出培养液，采用胰蛋白酶消化或者用细胞刮(会产生碎屑)刮下:带培养液进行离心，100-1500/mim510min。一般说来，因为在生产工序中已经过 100nm 或者 40nm 的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养 的。在实验室中没有必要再过滤处理，在大规模的细胞培养中往往将直接加到培养基中一起 过滤。

（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起。研究者可能会在中观察到一些絮状的 沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状 沉淀，因此就断定被污染了。透射电镜自噬小体检测胰酶消化，收集作用后的细胞，离心，先将细胞块固定在2。并且当研究者将样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可 以运动的小黑点，因此就更加确认是被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商 确认，但终确定没有被污染而只是沉淀。为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将放在 培养箱中培养观察是否有菌，而是将加到琼脂板上进行培养以观察是否有***生长。另外，也可以进 行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。